各位高人：我最近在作一个大片段的克隆，但是在作质粒（40K）的抽提时遇到了麻烦，总是抽不出质粒，偶尔抽出来也是很淡，我们用的是omega的普通抽提试剂盒。我也曾试过传统的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液抽提，但总是有蛋白和RNA的污染，不知该如何是好？不知各位在抽提较大的质粒时有什么好的方法，或者有什么好的试剂盒，请各位指点！

[ Last edited by telomerase on 2007-11-28 at 17:31 ]

超纯度大型质粒的抽提试剂盒

专门用于纯化小于250kb的BAC、PAC、P1或粘粒DNA，可彻底去除基因组DNA的污染。



货名                                 规格           货号                 价格(¥)

QIAGEN large-Construct Kit       10perps         12462                 4338

非常感谢楼上的朋友

:mad: 除了使用试剂盒,还有其他方法吗?怎么没人回复啊?

质粒大,所以拷贝会少自然提出的也少,用碱法提应该可以,多集些菌,然后蛋白那部多抽些应该会好些,最后消化时间也略长些吧,2h可以试一下

有用

减法抽提的量确实比较大，我们实验室都是用这种方法抽30000左右的大质粒的。你的量比较少可能有以下几个问题：
1. 大质粒不能保菌，每次都要转化质粒，调斑。剩余的部分菌液，赶在第二天前大扩。千分之一加菌液，青霉素千分之一稍小些。
2. 摇菌时间保证十二小时，时间稍长，大质粒会迅速消失。